Evaluation of platelet-rich plasma gel as an angiogenesis-inducing agent in canine advancement skin flaps / Avaliação do gel de plasma rico em plaquetas como agente indutor da angiogênese em flapes cutâneos de avanço em cães

This work aimed to evaluate the effect of platelet-rich plasma (PRP) on advancement skin flaps in dogs regarding improvement of vascularization, with focus on increasing its viable area, since there are reports that it is a potential angiogenesis stimulator. The experimental group was composed of eight adult bitches, in which two advancement skin flaps were made in the ventral abdominal region. No product was applied in the control flap (CF), while PRP was used in the contralateral flap, called treated flap (TF). The areas were clinically evaluated every two days until the 7th postoperative day regarding skin color and presence of necrosis. At 10 days, both flaps were removed and submitted to histological examination and blood vessel morphometry. The vessels counted in each group were statistically analyzed by the F-test at 1% probability. Results showed no significant difference in macroscopic changes in the wound, or CF and TF vascularization, thus suggesting that PRP gel did not improve advancement skin flap angiogenesis in bitches under the experimental conditions in which this research was developed.(AU)

Objetivou-se com o presente artigo avaliar a ação angiogênica do gel de plasma rico em plaquetas (PRP) em flapes cutâneos de avanço em animais da espécie canina, visando aumentar a viabilidade da pele após o procedimento, uma vez que existem relatos de que o produto é um potente estimulador da angiogênese. O grupo experimental foi composto por oito cadelas adultas, onde foram confeccionados dois flapes de avanço (de padrão subdérmico) na região abdominal ventral. Em um dos flapes, considerado controle (FC) não foi aplicado nenhum produto, enquanto que no flape contralateral, denominado tratado (FT), foi usado o gel de PRP. As áreas foram macroscopicamente avaliadas a cada dois dias até o 7º dia de pós-operatório em relação à coloração da pele e presença de área de necrose, e com 10 dias ambos os flapes foram coletados por biópsia e submetidos ao exame histológico e morfometria dos vasos sanguíneos. Os vasos contados em cada grupo foram estatisticamente analisados pelo teste de F ao nível de 1% de probabilidades. Os resultados demonstraram que não houve diferença significativa nas alterações macroscópicas das feridas e na morfometria vascular dos FC e FT, sugerindo dessa maneira que dentro das condições experimentais nas quais a pesquisa foi executada, que o gel de PRP não incrementou a angiogênese de flapes de avanço em cadelas.(AU)

Análise da ação do gel de plaquetas e glutamina em mucosite causada por quimioterapia induzida em ratos Wistar / Analysis of Platelet Gel Action and Glutamine in Mucositis caused by chemotherapy induced in Wistar Rats

Neste estudo avaliou-se a ação do gel de Plaquetas e da Glutamina no processo de cicatrização de lesões bucais causadas por mucosite induzida por quimioterapia em ratos Wistar. Foram utilizados 50 animais divididos em 05 grupos: um Grupo A (Gel de Plaquetas), Grupo B (Glutamina tópica), Grupo C (Glutamina gavagem), Grupo D (Glutamina + Gel de plaquetas) e Grupo E (controle +). A partir do 7o dia após a quimioterapia, avaliou-se os graus de mucosite e iniciou-se a aplicação dos medicamentos propostos para cada grupo. O sacrifício dos animais ocorreu em 5 e 10 dias após o início de aplicação dos medicamentos. Foram realizadas as biópsias da mucosa jugal e língua para análise do exame histopatológico onde se avaliou a quantidade de macrófagos, linfócitos e queratinização. Os graus de mucosite desenvolvidos na 1a e 2a fase do experimento apresentaram variação numérica importante, mas sem diferenças estatísticas significantes. Na análise histológica, resultados estatisticamente significativos foram obtidos (Fase 1) para linfócitos em mucosa jugal, onde o grupo B (glutamina) foi maior que o do grupo D (gel de plaquetas + glutamina) (p = 0,032); os linfócitos em língua do grupo A (gel de plaquetas) (p = 0,000) foi superior quando comparado com todos os outros grupos. A queratinização em mucosa jugal no grupo D (Fase 1) apresentou resultados significativamente superiores quando comparada com a queratinização dos demais grupos. A queratinização em língua no grupo D apresentou diferenças estatisticamente significantes (p = 0,000) e maior em relação aos outros grupos. Na fase 2, os macrófagos em língua tiveram resultados significantes entre os grupos A e C (p = 0,031) e A e E (p = 0,006), onde A foi maior. Diante dos resultados encontrados, concluiu-se que os biocurativos utilizados neste estudo promoveram uma maior reação inflamatória no conjuntivo e maior queratinização no epitélio. Entretanto, clinicamente, nas lesões observadas, o tempo de cicatrização foi...

Among bio-curatives there are those derived from the addition "in vitro" of thrombin and calcium gluconate to the platelet rich human plasma that stimulate its degranulation to releasing of growth factors acting on the healing process. Glutamine is the amino acid present in plasma and muscle tissue being considered an important energetic source for the immune system cells. Mucositis is a denomination for the changes that occur in the oral mucosa, mainly due to the cancer treatments. In this study, the action of platelet gel and Glutamine was evaluated in the oral lesions healing process caused by mucositis induced by chemotherapy in Wistar rats. 50 animals divided into 05 groups were used: A Group (Platelet Gel), B Group (Topical glutamine), C Group (Glutamine gavage), D Group (Glutamine + Platelet Gel) and E Group (control +). From the 7th day after chemotherapy, the degree of mucositis was evaluated and the proposed drug application began for each group. The animal sacrifice occurred within 5 to 10 days after the medicine application beginning. Jugal and tongue mucosa biopsies for histopathological examination analysis were carried out which evaluated the macrophages amount, lymphocytes and keratinization. The mucositis degrees developed in the 1st and 2nd phase of the experiment showed important numerical variation, but without meaningful statistical differences. In the histological analysis, statistically meaningful results were obtained (Phase 1) for lymphocytes in the jugal mucosa where the B group (glutamine) was higher than D group (platelet gel + glutamine) (p = 0,032); lymphocytes in tongue in A group (platelet gel) (p = 0,000) was higher when compared to all other groups. Keratinization in the jugal mucosa in D group (Phase 1), showed meaningfully superior results when compared to the keratinization of the other groups. The Keratinization in tongue in D group showed meaningful statistical differences (p = 0,000) and higher compared to the other...

Análise da ação do gel de plaquetas e glutamina em mucosite causada por quimioterapia induzida em ratos Wistar / Analysis of Platelet Gel Action and Glutamine in Mucositis caused by chemotherapy induced in Wistar Rats

Neste estudo avaliou-se a ação do gel de Plaquetas e da Glutamina no processo de cicatrização de lesões bucais causadas por mucosite induzida por quimioterapia em ratos Wistar. Foram utilizados 50 animais divididos em 05 grupos: um Grupo A (Gel de Plaquetas), Grupo B (Glutamina tópica), Grupo C (Glutamina gavagem), Grupo D (Glutamina + Gel de plaquetas) e Grupo E (controle +). A partir do 7o dia após a quimioterapia, avaliou-se os graus de mucosite e iniciou-se a aplicação dos medicamentos propostos para cada grupo. O sacrifício dos animais ocorreu em 5 e 10 dias após o início de aplicação dos medicamentos. Foram realizadas as biópsias da mucosa jugal e língua para análise do exame histopatológico onde se avaliou a quantidade de macrófagos, linfócitos e queratinização. Os graus de mucosite desenvolvidos na 1a e 2a fase do experimento apresentaram variação numérica importante, mas sem diferenças estatísticas significantes. Na análise histológica, resultados estatisticamente significativos foram obtidos (Fase 1) para linfócitos em mucosa jugal, onde o grupo B (glutamina) foi maior que o do grupo D (gel de plaquetas + glutamina) (p = 0,032); os linfócitos em língua do grupo A (gel de plaquetas) (p = 0,000) foi superior quando comparado com todos os outros grupos. A queratinização em mucosa jugal no grupo D (Fase 1) apresentou resultados significativamente superiores quando comparada com a queratinização dos demais grupos. A queratinização em língua no grupo D apresentou diferenças estatisticamente significantes (p = 0,000) e maior em relação aos outros grupos. Na fase 2, os macrófagos em língua tiveram resultados significantes entre os grupos A e C (p = 0,031) e A e E (p = 0,006), onde A foi maior. Diante dos resultados encontrados, concluiu-se que os biocurativos utilizados neste estudo promoveram uma maior reação inflamatória no conjuntivo e maior queratinização no epitélio. Entretanto, clinicamente, nas lesões observadas, o tempo de cicatrização foi...

Among bio-curatives there are those derived from the addition "in vitro" of thrombin and calcium gluconate to the platelet rich human plasma that stimulate its degranulation to releasing of growth factors acting on the healing process. Glutamine is the amino acid present in plasma and muscle tissue being considered an important energetic source for the immune system cells. Mucositis is a denomination for the changes that occur in the oral mucosa, mainly due to the cancer treatments. In this study, the action of platelet gel and Glutamine was evaluated in the oral lesions healing process caused by mucositis induced by chemotherapy in Wistar rats. 50 animals divided into 05 groups were used: A Group (Platelet Gel), B Group (Topical glutamine), C Group (Glutamine gavage), D Group (Glutamine + Platelet Gel) and E Group (control +). From the 7th day after chemotherapy, the degree of mucositis was evaluated and the proposed drug application began for each group. The animal sacrifice occurred within 5 to 10 days after the medicine application beginning. Jugal and tongue mucosa biopsies for histopathological examination analysis were carried out which evaluated the macrophages amount, lymphocytes and keratinization. The mucositis degrees developed in the 1st and 2nd phase of the experiment showed important numerical variation, but without meaningful statistical differences. In the histological analysis, statistically meaningful results were obtained (Phase 1) for lymphocytes in the jugal mucosa where the B group (glutamine) was higher than D group (platelet gel + glutamine) (p = 0,032); lymphocytes in tongue in A group (platelet gel) (p = 0,000) was higher when compared to all other groups. Keratinization in the jugal mucosa in D group (Phase 1), showed meaningfully superior results when compared to the keratinization of the other groups. The Keratinization in tongue in D group showed meaningful statistical differences (p = 0,000) and higher compared to the other...

Células-tronco mononucleares associadas ao plasma rico em plaquetas na consolidação de falha óssea no cão. Estudo piloto / Mononuclear stem cells associated with platelet-rich plasma in the consolidation of bone defects in dogs. A pilot study

A padronização de técnicas e o teste da associação do Plasma Rico em Plaquetas (PRP) e das Células-Tronco Mononucleares (CTMs) na consolidação de falhas ósseas corticais, por meio de avaliação clínica, biomecânica, radiológica e histológica, é avaliada em um estudo piloto. Foram utilizados seis cães adultos, fêmeas, sem raça definida, pesando entre 5 e 10kg, separados por sorteio aleatório em seis tratamentos. Foi confeccionada uma falha elíptica de 1,0x0,4cm na cortical medial diafisária da tíbia direita de cada animal, sendo preenchida de acordo com o tratamento proposto. No cão I, a falha foi preenchida com solução fisiológica (SF); no II, com o PRP; no III, com a fração total das células mononucleares (FTCM); no IV, com a fração vascular estromal (FVE); no V, com o PRP associado à FTCM; no VI, com a associação PRP e FVE. Foram realizadas avaliações: clínicas, diariamente; dos graus de claudicação, semanalmente; radiológica e perimetria da coxa, antes, no pós-operatório imediato, aos 7, 14, 21 e 30 dias; biomecânica, antes do procedimento, aos 10, 20 e 30 dias; e biópsias, aos 15 e 30 dias. A FTCM obteve uma contagem e viabilidade média de 2,0x108cél. e 90%, respectivamente, enquanto a FVE obteve 3x106cél. e 50%. O PRP concentrou, em média, sete vezes o número inicial de plaquetas do sangue total, de 250.000 µl-1 plaquetas no sangue total para 1.750.000 µl-1 plaquetas no PRP. Obteve-se padronização adequada de técnicas, possibilitando o teste da associação entre as células-tronco mononucleares (CTMs) e o plasma rico em plaquetas (PRP), assim como seu uso isolado, no reparo de falhas ósseas corticais, indicando a possibilidade de a associação FTCM e PRP ser o melhor tratamento...

The standardization of techniques and tests of the association of Platelet Rich Plasma (PRP) and Mononuclear Stem Cells (MSCs) in the consolidation of cortical bone defects by clinical, biomechanical, radiological, and histological analysis is evaluated in a pilot study. Six adult female dogs of mixed breed, weighing between 5 and 10kg, separated by random draw in six treatments were used. An elliptical failure of 1.0 x0.4cm was done in the medial diaphyseal cortical of the right tibia of each animal, that was filled according with the proposed treatment. In dog I, the failure was filled with saline (S), in dog II with PRP, in dog III with total mononuclear cell fraction (TMCF), in dog IV with stromal vascular fraction (SVF), in dog V with association of PRP and TMCF, and in dog VI with an association of PRP and SVF. Daily clinical evaluation, weekly degrees of lameness, radiological and girth before, immediate postoperative, 7, 14, 21 and 30 days, biomechanics before the procedure, at 10, 20 and 30 days, and biopsies at 15 and 30 days were performed. The TMCF got a count and viability of 2,0x108cells and 90% respectively, while for SVF it was 3x106cells and 50%, respectively. The PRP concentrated on average seven times the original number of platelets from whole blood, platelets from whole blood 250.000 μl-1 to 1.750.000 μl-1 platelets in PRP. This afforded adequate standardization of techniques, enabling the test of association between mononuclear stem cells (MSCs) and platelet-rich plasma(PRP), as well as their separate use to repair cortical bone defects, indicating the possibility of the association between FTCM and PRP to be the best treatment...

Comparação entre dois protocolos para obtenção de plasma rico em plaquetas, em cães / Comparison between two protocols to obtain platelet-rich plasma in dogs

Avaliaram-se dois protocolos para a produção de plasma rico em plaquetas (PRP) com o sangue de 20 cães adultos. Foram coletados três frascos de sangue em que um deles foi usado para produção do PRP por meio do protocolo A - centrifugação única a 1200rpm/10min -, o outro para fabricação do PRP pelo protocolo B - primeira centrifugação a 1200rpm/10min e a segunda centrifugação a 1600rpm/10min - e o terceiro para realização da contagem plaquetária no sangue total, que serviu de parâmetro para os valores alcançados no PRP. O protocolo no qual foi possível alcançar maior concentração plaquetária foi testado em outros 20 cães para avaliar sua reprodutibilidade. Constatou-se que o protocolo B resultou em maior plaquetometria em 100 por cento das amostras e concluiu-se ser ele eficiente para a produção do PRP em cães.

The objective of this paper was to analyze two protocols for the production of platelet rich plasma (PRP) in dogs. Peripheral blood of 20 adult dogs was collected into three tubes. The first was processed through protocol A - single centrifugation at 1200rpm for 10min - , the second was submitted to protocol B - a first centrifugation at 1200rpm for 10min and a second centrifugation at 1600rpm for 10min - and the third was used to perform platelet count in whole blood, which served as a parameter for values obtained in PRP. The protocol in which it was possible to achieve a higher platelet count was tested in other 20 dogs to evaluate its reproducibility. Protocol B resulted in a superior platelet count in 100 percent of the samples, concluding that the referred protocol is effective for PRP production in dogs.

Plasma rico em plaquetas para reparação de falhas ósseas em cães / Platelet-rich plasma for canine bone restoration

As plaquetas chegam rapidamente ao local da ferida e liberam múltiplos fatores de crescimento (FC) e citocinas que contribuem para a reparação óssea e aumentam a vascularização local. O Plasma Rico em Plaquetas (PRP) concentra as plaquetas e os FC liberados por elas, aceleram a formação óssea e melhora a qualidade do trabeculado. Este trabalho apresenta um protocolo para confecção de PRP e demonstra alguns aspectos da sua utilização na reparação óssea de cães. O protocolo foi desenvolvido a partir de sangue coletado por punção jugular em três cães adultos, pesando em média 20kg. Para avaliação da aplicação clínica e dos aspectos da reparação óssea, foram criadas duas falhas mediais no terço proximal de cada tíbia. Assim, a falha 1 não foi preenchida, constituindo o controle, a falha 2 foi preenchida com 3mg de enxerto ósseo autógeno da crista da tíbia, a falha 3 com gel de plaquetas (PRP) e falha a número 4 com a associação PRP e 3mg de enxerto ósseo autógeno. O protocolo laboratorial proposto mostrou-se de fácil execução e de baixo custo e possibilitou a concentração adequada de plaquetas no PRP final, cujo número foi dependente da contagem inicial no sangue total de cada animal. A comparação da radiopacidade na região da falha, em todos os tratamentos, e ao longo do tempo demonstrou que o PRP associado ao enxerto determinou maior precocidade e uniformidade de radiopacidade, quando comparado à falha preenchida pelo PRP e ao enxerto usados isoladamente, e sendo que ambos determinam melhores resultados de preenchimento que a falha mantida sem tratamento.

The platelets arrive quickly at the injury site and release several growth factors (GF) and citokines that contribute to bone repair and increasing local vascularization. The Platelet-rich Plasma (PRP) concentrates the platelets and their growth factors, increasing the rate of bone formation and better quality of trabecular bone. This research presents a protocol to PRP formulation and demonstrates some aspects about the use in canine bone repair. In this protocol blood was obtained from the jugular ven of tree adult dogs with medium weight of 20kg to produce PRP. Two defects in the medial aspect of proximal third of the tibia were surgically created to evaluate the clinical and radiographic aspect of PRP. The control defect wasn’t treated.The defect 2 was filled with 3 mg of autogenous bone graft from the tibia crest. The defect 3 was filled with PRP alone and the number 4 with PRP in the combination with 3mg autogenous bone graft. The proposed laboratory protocol demonstrated to be easy to execute at low cost. Further, it was adequate to concentrate platelets in final PRP, whose number was dependent on the blood from each dog. Comparing the defect regions, was concluded that the association of PRP and bone graft showed greater precocity and uniform radiopacity than the PRP or bone graft isolated, although both determine better results than the defect without treatment.